ຊຸດ ELISA ແມ່ນອີງໃສ່ໄລຍະແຂງຂອງ antigen ຫຼື antibody ແລະ enzyme labeling ຂອງ antigen ຫຼື antibody. ແອນຕິເຈນ ຫຼື ແອນຕິບໍດີທີ່ຜູກມັດກັບພື້ນຜິວຂອງຕົວຂົນສົ່ງແຂງຍັງຄົງຮັກສາກິດຈະກໍາທາງພູມຄຸ້ມກັນຂອງມັນ, ແລະ ເອນໄຊທີ່ຕິດສະຫຼາກ antigen ຫຼືແອນຕິບໍດີຮັກສາທັງກິດຈະກໍາທາງພູມຄຸ້ມກັນຂອງມັນແລະກິດຈະກໍາຂອງເອນໄຊ. ໃນເວລາຂອງການກໍານົດ, ຕົວຢ່າງທີ່ຢູ່ພາຍໃຕ້ການທົດສອບ (ໃນທີ່ພູມຕ້ານທານຫຼື antigen ໄດ້ຖືກວັດແທກ) reacts ກັບ antigen ຫຼືພູມຕ້ານທານຢູ່ໃນດ້ານຂອງພາທຸກແຂງ. ສະລັບສັບຊ້ອນ antigen-antibody ສ້າງຕັ້ງຂຶ້ນໃນຕົວຂົນສົ່ງແຂງແມ່ນແຍກອອກຈາກສານອື່ນໆໃນຂອງແຫຼວໂດຍການລ້າງ.
ແອນຕິເຈນ ຫຼື ພູມຕ້ານທານທີ່ມີປ້າຍຊື່ Enzyme ໄດ້ຖືກເພີ່ມ, ເຊິ່ງຍັງຜູກມັດກັບຕົວຂົນສົ່ງແຂງໂດຍການຕິກິຣິຍາ. ໃນເວລານີ້, ປະລິມານຂອງ enzyme ໃນໄລຍະແຂງແມ່ນຢູ່ໃນອັດຕາສ່ວນຂອງສານໃນຕົວຢ່າງ. ຫຼັງຈາກເພີ່ມ substrate ຂອງປະຕິກິລິຍາ enzyme, substrate ໄດ້ຖືກ catalyzed ໂດຍ enzyme ກາຍເປັນຜະລິດຕະພັນສີ. ປະລິມານຂອງຜະລິດຕະພັນແມ່ນກ່ຽວຂ້ອງໂດຍກົງກັບປະລິມານຂອງສານທີ່ທົດສອບໃນຕົວຢ່າງ, ດັ່ງນັ້ນການວິເຄາະດ້ານຄຸນນະພາບຫຼືປະລິມານສາມາດປະຕິບັດໄດ້ຕາມຄວາມເລິກຂອງສີ.
ປະສິດທິພາບ catalytic ສູງຂອງ enzymes ໂດຍທາງອ້ອມ amplifies ຜົນໄດ້ຮັບຂອງການຕອບສະຫນອງຂອງພູມຕ້ານທານ, ເຮັດໃຫ້ການວິເຄາະມີຄວາມອ່ອນໄຫວສູງ. ELISA ສາມາດຖືກນໍາໃຊ້ເພື່ອກໍານົດ antigens, ແຕ່ຍັງສາມາດຖືກນໍາໃຊ້ເພື່ອກໍານົດພູມຕ້ານທານ.
ຫຼັກການພື້ນຖານຂອງຊຸດ ELISA
ມັນໃຊ້ປະຕິກິລິຍາສະເພາະຂອງ antigen ແລະ antibody ເພື່ອເຊື່ອມຕໍ່ວັດຖຸກັບ enzyme, ແລະຫຼັງຈາກນັ້ນຜະລິດປະຕິກິລິຍາສີລະຫວ່າງ enzyme ແລະ substrate ສໍາລັບການກໍານົດປະລິມານ. ຈຸດປະສົງຂອງການວັດແທກສາມາດເປັນພູມຕ້ານທານຫຼື antigen.
ມີສາມ reagents ທີ່ຈໍາເປັນໃນວິທີການກໍານົດນີ້:
â ພູມຕ້ານທານໄລຍະແຂງ ຫຼື ພູມຕ້ານທານ (ຕົວດູດຊຶມພູມຄຸ້ມກັນ)
âυ¡ ເອນໄຊມທີ່ຕິດສະຫຼາກ ແອນຕິເຈນ ຫຼື ແອນຕິບໍດີ (ເຄື່ອງໝາຍ)
⢠substrate ສໍາລັບການປະຕິບັດຂອງເອນໄຊ (ຕົວແທນພັດທະນາສີ)
ໃນການວັດແທກ, ພູມຕ້ານທານ (ພູມຕ້ານທານ) ທໍາອິດຖືກຜູກມັດກັບຜູ້ຂົນສົ່ງແຂງ, ແຕ່ຍັງຄົງຮັກສາກິດຈະກໍາຂອງພູມຕ້ານທານ, ແລະຫຼັງຈາກນັ້ນ conjugate (ເຄື່ອງຫມາຍ) ຂອງ antibody (antigen) ແລະ enzyme ໄດ້ຖືກເພີ່ມ, ເຊິ່ງຍັງຄົງຮັກສາກິດຈະກໍາພູມຕ້ານທານເດີມແລະ enzyme. ກິດຈະກໍາ. ເມື່ອ conjugate reacts ກັບ antigen (ພູມຕ້ານທານ) ເທິງ carrier ແຂງ, substrate ທີ່ສອດຄ້ອງກັນຂອງ enzyme ໄດ້ຖືກເພີ່ມ. ນັ້ນແມ່ນ, hydrolysis catalytic ຫຼືປະຕິກິລິຍາ REDOX ແລະສີ.
ຮົ່ມຂອງສີທີ່ມັນຜະລິດແມ່ນອັດຕາສ່ວນກັບຈໍານວນ antigen (ພູມຕ້ານທານ) ທີ່ຈະວັດແທກ. ຜະລິດຕະພັນສີນີ້ສາມາດສັງເກດເຫັນໄດ້ດ້ວຍຕາເປົ່າ, ກ້ອງຈຸລະທັດ optical, ກ້ອງຈຸລະທັດເອເລັກໂຕຣນິກ, ຍັງສາມາດວັດແທກໄດ້ໂດຍ spectrophotometer (ເຄື່ອງມືປ້າຍ enzyme). ວິທີການແມ່ນງ່າຍດາຍ, ສະດວກ, ໄວແລະສະເພາະ.